前言:
碘醚柳胺是鹵化水楊酰苯胺類殺吸蟲藥,可以抑制蟲體線粒體的磷酸化過程,從而阻止蟲體內(nèi)三磷酸腺甙(ATP)的合成,導(dǎo)致蟲體能量代謝的活力迅速減弱而死亡,隨著國內(nèi)驅(qū)蟲藥的廣泛應(yīng)用和研究,發(fā)現(xiàn)碘醚柳胺有明顯胚胎毒性,食用含有碘醚柳胺的動物性食品會影響身體健康。
本文參照《動物性食品中碘醚柳胺殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(征求意見稿)》,利用EZsepTM MAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802)凈化樣液,再通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測,建立了一種對牛奶中碘醚柳胺殘留量進行分析的方法。
關(guān)鍵詞:
牛奶,碘醚柳胺,固相萃取
1 實驗過程
1.1儀器與試劑
MPREP-SPE08手動固相萃取裝置,貨號:PZ0008,北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
E.T.氮吹濃縮儀,貨號:C020017,北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
4500質(zhì)譜系統(tǒng),SCIEX公司;
EZsepTM MAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802),北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
冷凍離心機,GL-20G-Ⅱ,上海安亭科學(xué)儀器廠 ;
甲醇(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
乙腈(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
甲酸、氨水、三乙胺等化學(xué)品均為分析純或以上規(guī)格,購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
1.2 工作液配制
碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):100mg/瓶,購自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。
碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液:取碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)品適量(相當(dāng)于有效成分約10mg),精密稱取,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為1000μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液。
碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液:移取碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.1mL,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為10μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液。
碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液:碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液0.1mL,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為0.1μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液。
依次移取0.1μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液0.02、0.1、0.5、2.0、5.0mL,分別置于10mL容量瓶中用甲醇定容至刻度,得到濃度依次為0.2μg/L、1μg/L、5μg/L、20μg/L、50μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。
1.3 實驗部分
1.3.1 樣品制備
取牛奶試樣2g,置于50 mL聚丙烯離心管中,加10.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液超聲提取10 min,8000 r/min離心5 min,收集上清液至另一50 mL離心管中,向殘渣中加入8.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液,重復(fù)提取一次,合并兩次上清液,用乙腈定容至20 mL,混勻,待凈化。
1.3.2 固相萃取凈化
EZsepTM MAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802)用5mL乙腈進行活化,取1.3.1待凈化液5.0 mL上樣,上樣結(jié)束后用5mL乙腈淋洗萃取柱,再用5mL 5%甲酸乙腈洗脫萃取柱,收集洗脫液,使用E.T.氮吹濃縮儀在45℃下氮氣濃縮至近干,加2.0 mL甲醇渦旋混勻,過微孔濾膜后供LC-MS/MS測定。
1.3.3 LC-MS/MS儀器條件
色譜柱:Kinetex Luna PFP(2.6μm,3*100mm)
檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);
流動相:A:0.1%氨水水溶液 B: 甲醇
流速:0.3mL/min
進樣量:5μL
表1流動相梯度洗脫表
時間/min | 流動相A/% | 流動相B/% |
0 | 70 | 30 |
5 | 0 | 100 |
8 | 0 | 100 |
8.1 | 70 | 30 |
10 | 70 | 30 |
2 實驗結(jié)果
圖1 標(biāo)液色譜圖
圖2 碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)曲線
3 結(jié)論
本實驗使用EZsepTM MAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802)對牛奶中碘醚柳胺進行凈化,通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進行測定,該方法的加標(biāo)回收率范圍89.6%~95.3%,RSD為2.3%,能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。也說明EZsepTM MAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802)能很好的完成方法中的凈化工作,結(jié)果穩(wěn)定、可靠。
參考文獻
[1] 《動物性食品中碘醚柳胺殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(征求意見稿)》
表 2 加標(biāo)回收率
加標(biāo)濃度μg/kg | 回收率(%) | 平均值 | RSD | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | % | % | |
20 | 91.6 | 91.0 | 89.9 | 89.6 | 90.6 | 95.3 | 91.3 | 2.3 |